Q1 :當使用 ALiCE® 表達輕鏈、重鏈或全尺寸抗體時，為什麼在 PAGE 中總是有其他片段？它們不是特異性蛋白質產品嗎？

A1 :演講中所展現的數據，是使用2014年早期Buntru等人所研發的前一代BY-2 lysate。

而ALiCE是煙草BY-2 lysate的進化與改進版本，產率以及組裝效能也提升許多。

在2014年文獻PAGE中所出現的其他片段，是全長單株抗體在SDS-PAGE的非還原條件下，因分子內脫硫化物鍵中斷，故導致有不同重鏈以及輕鏈分子結構形成的中間物產生 (如下圖所示，資料提供者為 LenioBio)；因此，會在PAGE中看到不同長度的片段。

Data from LenioBio R&D Internal. Humira (Adalimumab, humanized anti-TNF-α monoclonal antibody) expressed and purified from ALiCE®.

Q2 : 現在是否有任何商業公司使用 ALiCE®  來表達 SARS-Cov-2 的棘蛋白或疫苗的抗原？

A2 : ALiCE®目前只能用於研究目的。 是的，有公司正在使用ALiCE® E表達疫苗相關的抗原。

Q3 : 與第一個問題類似，為什麼演講中的數據顯示，與醣基化 GOD 相比，非醣基化的葡萄醣氧化酶產量更多？

A3 : 如前所述，ALiCE® 是先前描述的 BY-2 Lysate 的改進版本。此外，我們還進行了實驗條件的優化，以提高在ALiCE®產生的蛋白質的醣化比例。因此，像Gox（8個醣化位點）和SARS-CoV2（12個醣化位點）的S1 domain，這樣的蛋白質是可以被完全醣化的。

Q4 : 當我們採用這個平臺來表達我們的蛋白質時，如何確保ALiCE® 試劑的性能，batch-to-batch都具有相等的蛋白質表達能力？例如蛋白質大小、電性，以及醣化修飾程度 ?

A4 : ALiCE®試劑效能，在生產時經歷了嚴格的品管控制，我們是市場上無細胞系統中，蛋白質量方面有管控最嚴格的產品之一。此外，對於醣化蛋白，我們內部實驗顯示了ALiCE® 在batch-to-batch皆能再現蛋白醣化特徵與活性（在例如SARS-CoV2 棘蛋白的RBD、Humira和GOD等蛋白方面，都能獲得我們獲得了可再現的表達水準、醣化特徵和蛋白質活性）。

Q5 : 您打算推出大規模製造產品或材料嗎？您認為ALiCE®系統能否為未來的治療性蛋白質生產，成為比宿主系統更具成本效益的平臺？

A5 : 是的，我們計劃很快將材料用於大規模製造。ALiCE®對某些蛋白質來說具有成本效益，但也許並非適用於所有蛋白質，具體取決於市場價值。

Q6 : 對於商業研究或商業用途，您會收取與RUO版本ALiCE®有關的許可費用/授權金嗎 ？

A6 : 是的，我們將收取商業用途的許可費/授權金。 了解更多

Q7 : 如果我們想透過 ALiCE® 表達治療蛋白，您能否分享有關如何滿足監管或合規要求的經驗？

A7 : 當前工具僅用於研究目的。但是，我們正在為客戶和合作夥伴提供 ALiCE®作為 GMP 級材料。

Q8 : 我可以用線性DNA做為ALiCE® 的反應模板嗎？對於質粒DNA或線性DNA，你會建議選用哪種類型來執行ALiCE®？

A8 : 由於無細胞裂解物中含有外核素 (exonuclease)，因此使用線性DNA，將顯著減少蛋白質產量。但是，改用具有修改/保護端的線性DNA可導致更好的產量。
對於質粒，我們建議所使用的DNA必須確保擁有最少的RNase污染。由於Midi和Maxi在質粒製備中經歷了DNA沉澱步驟，這消除了固有的RNase污染。如果使用Mini質粒DNA（懷疑有RNase污染），那麼使用murine RNase inhibitor將可以提升蛋白質產量。然而，為了獲得最佳產量，我們建議使用Mida或Maxi所純化的質粒DNA。

Q9 : ALiCE®系統中的蛋白質大小是否有限制？

A9 : 我們已經能生產出高達150 kDa的蛋白質。但是，不能具體說明可以生產的蛋白質的大小是否有上限。